一、什么是清潔驗證？為什么清潔驗證的檢驗方法要經過驗證？

我們首先回顧一下，為什么要進行清潔？

清潔是為了除去產品殘留、工藝殘留和環境污染（removesproduct residues, process residues and environmental contaminants ）。

清潔驗證是為了證明清潔工藝（清潔SOP）能達到預期的清潔目的。

證明的辦法就是檢查（檢驗）產品殘留、工藝殘留和環境污染帶來的影響是否降低到足夠低。（并不需要最低）

清潔驗證要保證“設備/系統可以安全地生產后續產品（相同或不同產品）”，相當于對清潔工藝的安全性評估。

因此，清潔驗證中所使用的檢驗方法十分重要，需要進行適當的驗證。

（舉一個不太適當的例子，如果把清潔驗證比作是一個產品，那么檢驗方法就是一把尺，而對檢驗方法的驗證是就對尺的計量。）

二、檢驗方法的建立

1、清潔驗證的檢驗往往都需要建立專門的檢驗方法，這是因為：

A、檢驗的內容是殘留物，因此檢驗的限度值、線性范圍，都與產品的檢驗有很大的區別。

B、如果是外來污染物（如清潔劑），需要開發專門的檢驗手段。

C、如果活性成分在清潔過程中發生降解，那么原有的方法可能就不再適用。

2、檢驗方法的建立時需要一些必要的前提

A、首先要確定清潔方法，包括具體的清潔工藝或清潔SOP。

B、要有確定取樣方法，因為不同的取樣方式會對檢測結果造成干擾。

C、最重要的一點，要確定殘留物及限度標準，要圍繞著殘留物的性質和殘留限度的大小來選擇合適的檢驗方法。

3、選擇檢驗方法建議應考慮的一些因素

A、分析方法的選擇會受到實際情況的限制，選擇的出發點是該方法能夠滿足預期的目的。

B、開發新的分析方法時，應該考慮開發新的方法需要時間、人力、儀器成本。

建議首先選用公司現有的分析方法，或對現有方法的限度值進行調整。比如：藥典，公司的內控方法。

C、要考慮到清潔工藝的干擾，如使用清潔劑，要包括對特定成份殘留的檢測，尤其是當清潔劑的pH值變化較大的，還要考慮到清潔劑對活性成份的影響

。

D、還要考慮取樣過程的影響，如使用棉簽擦拭時，需要考慮方法的適用性，棉簽的干擾，棉簽對回收殘留物時的回收率。

E、當設備表面取樣時的回收率可能低于 100%時，需要進行適當的校正，以保證檢驗方法的限度要求能夠達到。

F、對特定的成份，還要考慮取樣至檢測的時間間隔，應評估貯存條件（時間、溫度、貯存的小瓶等）對樣品穩定性的影響。

G、如果活性成份在清潔過程產生降解，還要考慮到對降解產物的分析，或者采用一些非專屬性的方法是一個很好的辦法。

三、清潔驗證中檢驗方法的特定要求

清潔驗證的一個關鍵點是確定殘留限度，這里的殘留通常是指“產品殘留”（活性成份）的分析方法驗證。

通常情況下，清潔驗證的方法驗證與常用的方法學驗證一樣，應按照《中國藥典》附錄9101進行，參照“雜質測定”中定量或限度的方法進行驗證，包括準確性、精密度、專屬性、線性和范圍，以及定量限和檢測限等內容，需要注意以下方面：

A、準確性和精密度的驗證通常只需要在殘留限度范圍進行，一般為殘留物限度的50%-150，綜合回收率不低于75%，回收率的RSD應不大于10%。

B、定量限和檢測限必須低于樣品的可接受限度，而且最好是遠低于可接受限度，以確保清潔程序的耐用性。定量限通常達到限度標準的1/10，定量要求低于通常儀器分析的要求。

C、專屬性方法應關注可能只有在清潔工藝中使用到的其他物質（例如清潔劑）可能帶來的干擾。

對于使用合格/不合格方法來進行清潔驗證的公司， 不需進行全面的分析方法驗證，只需要報告樣品的結果是低于或等于或高于合格/不合格限度值。（適用于限度檢查） 

通常內毒素檢驗方法都是藥典方法，不需要進行正式的驗證，但需要確認其適用性。

經批準的微生物檢驗方法也不需要額外的方法驗證。

四、方法驗證與回收率實驗

指南中提到“分析方法驗證方案可以只包括殘留物溶液的驗證，也可以包括取樣回收率研究，盡管取樣回收率研究可以獨立于分析方法驗證而單獨進行”。

但有些同學會用取樣回收率實驗（一般是用于擦拭法）來代替方法學驗證，這是不全面的，這二者還是有區別的。

原因是，清潔驗證最關鍵的是要“防止出現假陰性的情況”，可能是分析方法的靈敏度不夠，也可能是取樣操作造成干擾， 或者回收率過低，影響因素較多。

從時間順序上來說，應該是先做方法學驗證，確認方法的可靠性后再進行取樣回收率實驗。

（相對于方法學驗證，回收率實驗是對取樣方法的驗證）

二者關注的范圍也不同，分析方法的回收率范圍一般為定量限至限度標準（或120%），是為了確認檢驗方法有足夠的靈敏度。而回收率的范圍一般在限度標準之上，是為了保證取樣操作的可靠性，在清潔不徹底時能夠有準確的取樣量。

同時，二者也有關聯，要考慮到取樣回收率對分析方法的影響，如果回收率低于100%時，分析方法的限度標準要經過系數的較正，也要考慮檢測限/定量限是否能夠達到要求。

五、參考文獻

1、《藥品生產驗證指南（2003版）》，化學工業出版社。

2、PDA Technical Report No. 29(Revised 2012)：Points to Consider for CleaningValidation。

3、FDA：GUIDE TO INSPECTIONS VALIDATION OF CLEANING PROCESSES。

4、《制藥企業GMP管理實用指南》，中國計量出版社。

5、《GMP認證指南》