作者：陳偉岳 俞勇 杜蓬
【摘要】
目的 探討丙型肝炎病毒核心抗原（HCV-cAg）、酶聯(lián)免疫檢測(cè)（ELISA）在丙型肝炎早期診斷中的應(yīng)用價(jià)值。
方法 83例抗-HCV陽(yáng)性、500例ALT異常但抗-HCV陰性血清同時(shí)進(jìn)行HCV-cAgELISA和HCV-PCR。
結(jié)果 83例抗-HCV陽(yáng)性血清中HCV-cAg和HCV RNA陽(yáng)性分別為33例和36例，其中32例共陽(yáng)性；500例ALT異常但抗-HCV陰性的血清中有3例HCV-cAg和HCV RNA同為陽(yáng)性。抗-HCV陽(yáng)性和陰性血清HCV-cAg和HCV RNA檢測(cè)結(jié)果符合率分別為94.0%和100%。
結(jié)論 HCV-cAgELISA敏感性與HCV-PCR類似，能夠有效縮短窗口期，操作簡(jiǎn)便，費(fèi)用低廉，在丙型肝炎早期診斷中具有很好的前景。
一、資料與方法
1.1樣本來源
83份抗-HCV陽(yáng)性血清來自寧波市中心血站無償獻(xiàn)血者，年齡18~55周歲，平均年齡29.11±10.37歲。
500例ALT異常但抗-HCV陰性的血清來自寧波市第二醫(yī)院輸血科，年齡18~85周歲，平均年齡32.33±15.43歲。
1.2檢測(cè)試劑
HCV-cAgELISA購(gòu)自山東萊博生物科技有限公司；
HCV-PCR試劑盒購(gòu)自中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院達(dá)安基因診斷中心。
1.3檢測(cè)方法
速率法檢測(cè)ALT，酶聯(lián)免疫法（ELISA）檢測(cè)抗-HCV和HCV-cAg，RT-PCR檢測(cè)HCV RNA，使用儀器為美國(guó)ABI公司的7500型熒光定量PCR儀，嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行操作，病毒載量＜103 拷貝/ml判定HCV RNA定量結(jié)果為陰性，103~105拷貝/ml為少量病毒復(fù)制，106~107拷貝/ml為中量病毒復(fù)制，＞1.0×108 拷貝/ml判定為大量病毒復(fù)制。所有試劑均在有效期內(nèi)使用。
1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件spss13.0對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理，采用χ²檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
2.1 HCV-cAgELISA和HCV-PCR結(jié)果
83例抗-HCV陽(yáng)性血清標(biāo)本中，分別有33和36例HCV-cAg和HCV RNA陽(yáng)性，陽(yáng)性率分別為39.8%和43.4%。500例ALT異常但抗-HCV陰性的血清有3例HCV-cAg和HCV RNA均陽(yáng)性.
2.2 HCV-cAg和HCVRNA檢測(cè)結(jié)果的符合率
抗-HCV陽(yáng)性血標(biāo)本中HCV-cAg和HCV RNA均為陽(yáng)性的32例，同為陰性的46例，抗-HCV陽(yáng)性血標(biāo)本中HCV-cAgELISA和HCV-PCR符合率為94.0%；另有1例HCV-cAg陽(yáng)性而HCV RNA陰性，4例HCV RNA陽(yáng)性而HCV-cAg陰性。
500例ALT異常但抗-HCV陰性的血清HCV-cAg和HCV RNA檢測(cè)結(jié)果完全一致，HCV-cAg和HCV RNA符合率為100%。HCV RNA檢測(cè)陽(yáng)性判定為HCV確證陽(yáng)性，HCV-cAgELISA方法的靈敏度為89.7%(35/39)，特異性為99.8％（543/544）。
2.3 HCV RNA拷貝數(shù)與HCV-cAg陽(yáng)性檢出率的相關(guān)性
39例HCV RNA陽(yáng)性血液中有35例HCV-cAg陽(yáng)性，HCV-cAgELISA陽(yáng)性檢出率為89.7%。觀察不同HCV RNA拷貝數(shù)血清樣本HCV-cAgELISA陽(yáng)性檢出率，發(fā)現(xiàn)35例HCV-cAg和HCV RNA均陽(yáng)性樣本，HCV RNA拷貝數(shù)較高≥1.0×105拷貝/ml，而4例HCV RNA陽(yáng)性但HCV-cAg陰性樣本HCV RNA拷貝數(shù)較低，其中3例為103數(shù)量級(jí)。
ELISA檢測(cè)抗-HCV仍是我國(guó)目前判斷HCV感染的常規(guī)篩選方法，廣泛用于無償獻(xiàn)血者、醫(yī)院受血者HCV感染篩查及HCV感染實(shí)驗(yàn)室診斷，然而HCV感染到血清抗-HCV陽(yáng)性要經(jīng)歷一個(gè)約40~70天的“窗口期”，這一時(shí)期ELISA抗-HCV試劑無法檢出HCV感染［4-6］。
由于“窗口期”存在而導(dǎo)致輸血性HCV感染的糾紛國(guó)內(nèi)外都有報(bào)道［8,9］。為減少“窗口期”存在導(dǎo)致的HCV感染發(fā)生，歐美國(guó)家紛紛推出靈敏度更高的HCV-PCR和HCV-cAg ELISA檢測(cè)HCV感染［4-6，8-10］。HCV RNA是病毒復(fù)制的直接標(biāo)志，但該方法需要特殊儀器、且人員配備的要求高還受很多因素影響[5,6]。
血清HCV-cAg陽(yáng)轉(zhuǎn)僅比HCV RNA遲1~2d，用ELISA檢測(cè)在儀器、人員配制要求比HCV-PCR易于滿足，有文獻(xiàn)報(bào)道HCV-cAgELISA用于血清抗-HCV陽(yáng)轉(zhuǎn)前的早期HCV感染的診斷以及HCV感染者治療前后病毒血癥情況的分析［4-7］。
我們用HCV-cAgELISA和HCV-PCR檢測(cè)500例ALT異常但抗-HCV陰性的血清，結(jié)果3例HCV RNA陽(yáng)性，后期跟蹤發(fā)現(xiàn)這3例患者3周后血清抗-HCV均陽(yáng)性，提示HCV-PCR能先于血清抗－HCV檢測(cè)到HCV感染，這3例樣本HCV-cAg ELISA同樣呈現(xiàn)陽(yáng)性，提示與文獻(xiàn)報(bào)道［4-6］類似HCV-cAg陽(yáng)性時(shí)間與HCV RNA接近，HCV-cAgELISA能有效縮短“窗口期”可替代HCV-PCR用于HCV感染的早期診斷。
另外，我們用HCV-cAgELISA和HCV-PCR同時(shí)檢測(cè)83例抗-HCV陽(yáng)性血清，結(jié)果HCV-cAgELISA和HCV-PCR檢測(cè)結(jié)果符合率為94%，提示HCV-cAgELISA具有很好的靈敏度，可能替代HCV-PCR用于HCV感染的早期診斷，且該方法無需特殊儀器、操作簡(jiǎn)單，利于基層單位推廣。
三、討論
ELISA檢測(cè)抗-HCV無法檢出窗口期的HCV感染；HCV RNA是病毒復(fù)制的直接標(biāo)志，但該方法需要特殊儀器、且人員配備的要求高還受很多因素影響；HCV-cAgELISA敏感性與HCV-PCR類似，能夠有效縮短窗口期，操作簡(jiǎn)便，費(fèi)用低廉，在丙型肝炎早期診斷中具有很好的前景。
來源：中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志
