多指標聯合檢測在丙型肝炎診斷中的應用

宿振國1,劉義慶2,盧志明2,周玉明1

( 1.濱州醫學院附屬醫院, 山東 濱州 256603; 2. 山東大學附屬省立醫院)

本研究擬探討在丙型肝炎診斷中丙型肝炎病毒抗體( HCVAb)聯合丙型肝炎病毒核酸(HCVRNA)、HCV 核心抗原( HCVcAg ) 和丙氨酸氨基轉移酶(ALT)檢測的臨床應用價值。

1 資料與方法

1. 1  臨床資料  選取2007年1- 12 月我院住院及門診患者血清及血漿樣本520 份,其中男300 份, 女220份;年齡13- 79 歲, 平均年齡 47. 7 歲。所有病例選擇均符合2004 年中華醫學會傳染病與寄生蟲病學分會指定的病毒性肝炎防治方案中的診斷標準[1],并排除合并感染其他病毒性肝炎,排除心、 腦、腎、 肺等器官疾病及高血壓、 糖尿病等。

1. 2  實驗方法

1. 2. 1 HCVRNA 定量檢測 采用實時熒光定量聚合酶鏈反應( FQ-PCR) ,儀器為Corbett 公司的Rotor Gene 3000儀,定量試劑由深圳匹基生物工程有限公司提供。由操作人員按操作說明書進行檢測。檢測結果大于1. 0  103IU / ml 為陽性。陽性結果重復測定兩次。

1. 2. 2 抗HCV 檢測 抗HCV( ELI SA) 第三代試劑盒,由北京萬泰生物藥業股份有限公司提供。由操作人員按操作說明進行檢測。臨界值( cut of f )確定:陽性對照每孔 OD 值 0. 5, 陰性對照孔 OD 值<0.08 時,測定結果有效,其臨界值( cut off) 為:陰性對照孔平均OD 值+ 0. 12。結果判定: 待檢測樣品的OD 值臨界值判定為HCV 抗體陽性, < 臨界值判定為HCV 抗體陰性。陽性結果重復測定兩次。

1. 2. 3  HCV核心抗原檢測 由山東萊博生物科技有限公司提供的丙型肝炎病毒核心抗原檢測試劑盒,臨界值( cut off)確定:陽性對照每孔OD 值> 0.6,陰性對照孔OD 值< 0. 1 時,測定結果有效,其臨界值( cut of f) 為:陰性對照孔平均OD 值+ 0. 06。結果判定:待檢測樣品的OD值臨界值判定為HCV 抗原陽性, < 臨界值判定為HCV 抗原陰性。陽性結果重復測定兩次。

1. 2. 4  ALT 定量檢測 采用日本OLYMPUS AU2700全自動生化分析儀和試劑,按操作說明檢測。ALT> 40 U/L 為陽性, ALT  40 U/ L 為陰性。陽性結果重復測定兩次。

1. 3  統計學方法 實驗數據采用SPSS13. 0 統計軟件進行統計學處理, 計數資料比較進行 2檢驗, P< 0. 05為差異有統計學意義。

2  結果

2. 1  520例丙型肝炎患者中, HCAb 陽性 416 例(占80. 0% ) , HCVRNA 陽性 262 例( 占 50. 4% ) , 兩者雙陽性率為 61. 5%, HCVAb 與HCVRNA 陽性率有顯著差異( P < 0. 01) , 經相關性分析, HCVAb 與HCVRNA 陽性率之間呈正相關( r = 0. 408, P <0.01) ,說明HCVAb 與HCVRNA 同時檢測可提高對丙型肝炎的診斷( 見表1)。

2. 2  520例丙型肝炎患者中, HCVAb 陽性 416 例(占80. 0% ) , HCV cAg 陽性 242 例( 占46. 5% ) , 兩者雙陽性率為54. 8% , 兩者HCVAb 與HCVcAg 陽性率有顯著差異( P < 0. 01) ,經相關性分析, HCVAb與HCVcAg陽性率之間呈正相關( r = 0. 332, P <0.01) ,說明HCVAb 與HCVcAg 同時檢測可提高對丙型肝炎的診斷(見表1)。

2. 3  520例丙型肝炎患者中,HCVAb( + ) 416 例( 占80% ) ,ALT 陽性 234 例(占 45. 0%) , 兩者雙陽性率為51. 0% ,HCVAb 與ALT 陽性率有顯著差異( P <0. 01) , 經相關性分析, HCVAb 與ALT 陽性率之間呈正相關( r = 0. 240, P < 0. 01) , 說明HCVAb 與AL T 同時檢測可提高對丙型肝炎的診斷(見表1) 。

表1  HCV Ab與 HCV RNA、 HCV cAg、 ALT 陽性率的關系抗體分組 例數 HCVRNA

+ -HCV c Ag+ -ALT+ -HCV Ab( + ) 416 252 164 228 188 212 204HCV Ab( - ) 104 10 94 14 90 22 82P 值 P < 0. 01 P< 0. 01 P < 0. 01

3  討論

人感染HCV 后,存在一個相當長時間的病毒血癥陽性,血清抗體陰性,這一段時間稱為檢驗窗口期, HCV 在體內復制活躍,傳染性很強。聚合酶鏈技術( PCR) 應用于檢測HCV RNA, 也可以極大地縮短窗口期, 檢測HCV RNA 具有高度靈敏度和特異性。我們在104例抗體陰性的血清中檢出10 例HCVRNA 陽性, 可能與標本中病毒復制不活躍,被檢者免疫功能低下,產生抗體很少, 或者處于血清陽轉的窗口期等[2],ELISA 法無法檢出HCVAb。這時補充HCVRNA 檢測,可以縮短窗口期, 有利于HCV 的早期診斷。應用ELISA 法早期檢測丙型肝炎病毒核心抗原(HCVcAg)可以克服抗HCV ELISA 篩選的局限從而達到縮短窗口期的目的, 也是降低HCV 感染的有效途徑之一。本文數據顯示416 份HCVAb 陽性血清和104份HCV Ab 陰性血清HCV cAg檢出率差異有統計學意義( P < 0. 01) ,提示檢測HCVcAg 具有一定的特異性。丙型肝炎病毒感染的患者在感染后 1- 4 周內血清HCVRNA 轉陽, 同時HCVcAg 出現,隨后ALT 增高和HCV 抗體轉陽[3]抗HCV 抗體不同于其他抗體,它不是一種保護性抗體,臨床上把它作為感染的證據, 但由于免疫功能的差異,部分患者感染后出現抗HCV 較晚,特別是免疫功能低下者或免疫抑制劑治療的患者可能不產生抗HCV 抗體。急性期的檢出率低,部分病例可出現假陰性。故通過檢測HCVcAg, 可以縮短病毒感染窗口期, 有助于篩查和早期診斷。在本研究結果中, 發現104 份抗體陰性標本中檢出抗原陽性14 份, 證明抗原檢測在一定程度上可以彌補抗體檢測的不足, 更有效地控制HCV 的傳播。丙氨酸氨基轉移酶( ALT) 簡稱轉氨酶, 在氨基酸代謝中有重要作用, 它是最常見的肝功能檢查項目。它主要分布在肝臟, 其次是骨骼肌、 腎臟、 心肌等組織。由于 ALT 在肝細胞中的濃度比血清高7000 倍,而且大部分都位于肝細胞的細胞漿中, 當肝細胞受損時, 肝細胞膜通透性增加, ALT 升高, 因此,它也是肝細胞損傷最敏感的指標之一。

本文數據研究顯示, 416 例HCVAb 陽性血清有204 份ALT未升高, 這可能是機體免疫力較強產生較多的抗體而病毒并沒有對肝細胞造成損傷, 機體處于一種應答平衡狀態所致; 104 例HCVAb 陰性血清有 22 例ALT 升高可能是急性丙型肝炎早期,機體產生的抗體很少但病毒已經對肝細胞造成較多損傷有關。

總之,HCVAb、 HCVRNA、 HCVcAg 和ALT 的聯合檢測己成為HCV 感染診斷的主要指標,擴大了檢測范圍,縮短了窗口期, 有利于早期診斷, 同時對這些指標的出現與消退規律、 及其與臨床病理演變關系的追蹤觀察分析將對HCV 感染情況、 治療方案的選擇和預后判斷等提供依據,有更直接的意義。

參考文獻:

[ 1]中華醫學會肝病學分會, 中華醫學會傳染病與寄生蟲病學分會.丙型肝炎防治指南[J] . 中華肝臟病雜志, 2004, 12: 194.

[ 2]Echevarria JM,Avellon A, J onas G, et al. Sensitivi ty of a modif i ed versi onof the ARCHITECT Ant i HCV t es t in detec t ing samples with immunoblot confirmed, low l evel ant ibody to hepatitis C virus[ J] . J Clin Virol, 2006,35(4) : 368.

[ 3]中華醫學會傳染病學會. 病毒性肝炎防治方案[ J] . 中華傳染病雜志, 2001, 19: 56.