李傳平，溫錦江，張金輝，陶勝來
【摘要】 目的 觀察自抽取血樣至PCR檢測HCV-RNA含量，在不同時間對檢出率的影響。方法 93例丙型肝炎血標本，在采集后，放置3℃～4℃貯存，分6個時間段，應(yīng)用實時熒光定量基因廣增儀檢測HCV-RNA含量。結(jié)果 1h內(nèi)98.92%，2h內(nèi)97.85%，3h內(nèi)71.6%，4h內(nèi)70.89%，8h內(nèi)69.66%，72h以上69.44%。結(jié)論 血樣放置時間長短，對HCV-RNA檢測結(jié)果有明顯影響。
【關(guān)鍵詞】 放置時間； 丙型肝炎； 病毒； 基因擴增
我科在丙型肝炎診治過程中，發(fā)現(xiàn)了PCR-HCV-RNA檢測結(jié)果與臨床療效不符，而與血樣采集后放置時間的長短有關(guān)。為驗證血樣放置時間長短對檢測結(jié)果的影響，從2003年4月～2005年6月對在本科診治的93例丙型肝炎血清，分別在采集1h、2h、3h、4h、8h、72h進行RNA檢測，觀察檢測時間對檢測結(jié)果的影響程度。
1 材料與方法
1.1 實驗材料 標本來自2003年4月～2005年6月在我科診治的93例丙型肝炎血清（診斷符合2000年西安會議修訂的肝炎診斷標準）［1］，病毒含量＞8.0×103copies/ml（參考值＜8.0×103copiesml）。
1.2 儀器和試劑
1.2.1 儀器 日本大和FQD-33A熒光定量PCR儀。
1.2.2 試劑 由中山大學(xué)達安基因診斷中心提供。
1.3 實驗方法 （1）負壓抽取靜脈血，放3℃～4℃貯存。（2）RNA提取和擴增按試劑說明書和儀器規(guī)程執(zhí)行。
2 結(jié)果
標本采集至檢測，1h內(nèi)98.92%（92/93），2h內(nèi)97.85%（91/93），3h內(nèi)71.6%（58/81），4h內(nèi)70.89%（56/79），8h內(nèi)69.66%（62/89），72h以上69.44%（50/72）。上述結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理分析證實檢測陽性率2h內(nèi)與2h以上差異有顯著性P＜0.01，3h以上各時間段檢測陽性率差異無顯著性，P＞0.05。
3 討論
丙型肝炎病毒（HCV）的持續(xù)感染，長期的慢性肝細胞壞死、再生，易形成肝硬化，可促進肝細胞癌變［2］。及早地發(fā)現(xiàn)和有效的診治是減少肝硬化和肝癌的有力措施。丙型肝炎病毒RNA是反映HCV感染、復(fù)制的最直接、可靠的指標，在確診丙型肝炎和篩選獻血員；在評價治療丙型肝炎藥物療效與預(yù)后判斷方面，HCV-RNA的檢測具有至關(guān)重要的作用。但HCV-RNA十分脆弱，易被降解，PCR-HCV-RNA檢測靈敏度高，易造成假陽性和假陰性結(jié)果［3］，給臨床工作造成誤導(dǎo)。本文研究表明，標本能否正確反映機體真實情況，除完善的實驗室條件外，與標本的待檢時間有密切關(guān)系。標本在采集2h內(nèi)檢測陽性率最高，與2h以上差異有顯著性，P＜0.01。我國是一個欠發(fā)達國家，丙肝病毒感染率較高，又多無癥狀，準確了解機體真實情況，能為臨床診斷、預(yù)防、治療提供可靠依據(jù)。丙型肝炎病毒RNA的檢測應(yīng)現(xiàn)采現(xiàn)做，應(yīng)以抽血到RNA檢測不超過2h為佳。
【參考文獻】
1 病毒性肝炎防治方案.中華傳染病雜志，2001，19：56-62.
2 蔣道榮，姚登福.急性丙型肝炎患者病毒株部分基因克隆及其序列分析.中華肝病雜志，2000，8：155.
3 王露楠，李金明.2000～2002年丙型肝炎病毒核酸逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)測定室間質(zhì)量評價.中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2003，26：778-779.
