李傳平，溫錦江，張金輝，陶勝來

  【摘要】  目的  觀察自抽取血樣至PCR檢測HCV-RNA含量，在不同時間對檢出率的影響。方法  93例丙型肝炎血標本，在采集后，放置3℃～4℃貯存，分6個時間段，應用實時熒光定量基因廣增儀檢測HCV-RNA含量。結果  1h內98.92%，2h內97.85%，3h內71.6%，4h內70.89%，8h內69.66%，72h以上69.44%。結論  血樣放置時間長短，對HCV-RNA檢測結果有明顯影響。

    【關鍵詞】  放置時間；  丙型肝炎；  病毒；  基因擴增

    我科在丙型肝炎診治過程中，發現了PCR-HCV-RNA檢測結果與臨床療效不符，而與血樣采集后放置時間的長短有關。為驗證血樣放置時間長短對檢測結果的影響，從2003年4月～2005年6月對在本科診治的93例丙型肝炎血清，分別在采集1h、2h、3h、4h、8h、72h進行RNA檢測，觀察檢測時間對檢測結果的影響程度。

    1  材料與方法

    1.1  實驗材料  標本來自2003年4月～2005年6月在我科診治的93例丙型肝炎血清（診斷符合2000年西安會議修訂的肝炎診斷標準）［1］，病毒含量＞8.0×103copies/ml（參考值＜8.0×103copiesml）。

    1.2  儀器和試劑

    1.2.1  儀器  日本大和FQD-33A熒光定量PCR儀。

    1.2.2  試劑  由中山大學達安基因診斷中心提供。

    1.3  實驗方法  （1）負壓抽取靜脈血，放3℃～4℃貯存。（2）RNA提取和擴增按試劑說明書和儀器規程執行。

    2  結果

    標本采集至檢測，1h內98.92%（92/93），2h內97.85%（91/93），3h內71.6%（58/81），4h內70.89%（56/79），8h內69.66%（62/89），72h以上69.44%（50/72）。上述結果經統計學處理分析證實檢測陽性率2h內與2h以上差異有顯著性P＜0.01，3h以上各時間段檢測陽性率差異無顯著性，P＞0.05。

    3  討論

    丙型肝炎病毒（HCV）的持續感染，長期的慢性肝細胞壞死、再生，易形成肝硬化，可促進肝細胞癌變［2］。及早地發現和有效的診治是減少肝硬化和肝癌的有力措施。丙型肝炎病毒RNA是反映HCV感染、復制的最直接、可靠的指標，在確診丙型肝炎和篩選獻血員；在評價治療丙型肝炎藥物療效與預后判斷方面，HCV-RNA的檢測具有至關重要的作用。但HCV-RNA十分脆弱，易被降解，PCR-HCV-RNA檢測靈敏度高，易造成假陽性和假陰性結果［3］，給臨床工作造成誤導。本文研究表明，標本能否正確反映機體真實情況，除完善的實驗室條件外，與標本的待檢時間有密切關系。標本在采集2h內檢測陽性率最高，與2h以上差異有顯著性，P＜0.01。我國是一個欠發達國家，丙肝病毒感染率較高，又多無癥狀，準確了解機體真實情況，能為臨床診斷、預防、治療提供可靠依據。丙型肝炎病毒RNA的檢測應現采現做，應以抽血到RNA檢測不超過2h為佳。

    【參考文獻】

    1  病毒性肝炎防治方案.中華傳染病雜志，2001，19：56-62.

    2  蔣道榮，姚登福.急性丙型肝炎患者病毒株部分基因克隆及其序列分析.中華肝病雜志，2000，8：155.

    3  王露楠，李金明.2000～2002年丙型肝炎病毒核酸逆轉錄聚合酶鏈反應測定室間質量評價.中華檢驗醫學雜志，2003，26：778-779.