ＨＣＶ核心抗原測定與ＨＣＶ抗體測定的比較分析

黃菲 甘新宇

成都軍區總醫院輸血科（成都 ６１００８３）

摘要  目的  探討ＨＣＶ核心抗原檢測與ＨＣＶ抗體檢測在測定獻血號ＨＣＶ感染上的差異。方法  將３６００名部隊獻血員的血清標本分別用兩種ＥＬＩＳＡ試劑盒進行ＨＣＶ核心抗原及ＨＣＶ抗體檢測，任一方法結果陽性者用熒光定量ＰＣＲ進行確診。結果  用ＨＣＶ核心抗原檢測方法檢出的陽性標本數與用ＨＣＶ ＲＮＡ檢測方法確診陽性標本數相符。結論  以ＨＣＶ核心抗原檢測代替ＨＣＶ抗體檢測是提高獻血員ＨＣＶ檢出率的較為理想的方法。

關鍵詞  ＨＣＶ；核心抗原；抗體

丙型肝炎是后果最嚴重的輸血傳播疾病之一。血站為了盡可能保證安全輸血，對獻血員采用兩種不同試劑進行兩次ＥＬＩＳＡ方法的抗ＨＣＶ檢測。在實際工作中，筆者發現漏檢標本仍然存在。為了避免這種情況繼續發生，國外已廣泛開展對獻血員進行ＨＣＶ ＲＮＡ檢測。但由于價格昂貴，不能在我國普及應用。我們用ＨＣＶ核心抗原測定方法和ＨＣＶ抗體測定方法分別對我血站３６００名獻血員進行ＨＣＶ感染檢測篩查，任一方法結果陽性者用熒光定量ＰＣＲ進行確診，從而分析這兩種方法在測定ＨＣＶ感染上的差異，現報告結果如下。

１  材料與方法

１．１  血清標本 

我血站２００４年度至２００５年度３６００份獻血員血清標本。

１．２  試劑 

ＨＣＶ核心抗原測定采用Ｏｒｔｈｏ　Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ公司ＨＣＶ核心抗原檢測雙抗體夾心法ＥＬＩＳＡ試劑盒。ＨＣＶ抗體測定采用北京吉比愛公司ＨＣＶ抗體檢測ＥＬＩＳＡ試劑盒。ＨＣＶ　ＲＮＡ檢測用Ｒｏｃｈｅ公司ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ熒光定量ＰＣＲ試劑盒，最大靈敏度為５００ｃｐ／ｍｌ。結果判斷：≥１×１０３ｃｐ／ｍｌ為陽性，＞１×１０３ｃｐ／ｍｌ為陰性。

１．３  儀器 

　　ＥＬＩＳＡ檢測的主要儀器：Ｌａｂａｔ２全自動加樣系統（美國Ｈａｍｉｌｔｏｎ公司）、Ａｎｔｈｏｓ３多功能控溫孵育酶標儀（奧地利Ａｎｔｈｏｓ  ｌａｂｔｅｃ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ公司）、Ａｎｔｈｏｓ  ｆｌｕｉｄｏ洗板機（奧地利Ａｎｔｈｏｓ公司）。ＰＣＲ檢測的主要儀器：ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ熒光ＰＣＲ儀（德國Ｒｏｃｈｅ公司）、Ｂ１６高速離心機。

１．４         方法

ＥＬＩＳＡ檢測操作嚴格按說明書進行，所采血樣離心后用Ｌａｂａｔ２加樣，每塊酶標板均在Ｈ１至Ｈ６位置分設空白、質控、陰性和陽性對照，然后進行孵育、洗板、加酶、顯色、終止、讀板、打印結果及統計分析ＯＤ值。ＨＣＶ　ＲＮＡ檢測操作按試劑盒說明書進行，擴增條件為９４℃預變性１ｍｉｎ，然后５５℃１ｍｉｎ，７２℃ ２ｍｉｎ，共３０個循環，反應結束后，由電腦自動分析計算結果。

２  結  果

３６００名獻血者中，ＨＣＶ核心抗原檢測為陽性的有１５例，ＨＣＶ抗體檢測為陽性的有１１例，且這１１例包括在前１５例中，對這１５例血清行熒光定量ＰＣＲ檢測，結果均為陽性。見表１。表１  不同方法檢測ＨＣＶ感染的情況（略）

３  討  論

    ＨＣＶ核心抗原是由ＨＣＶ基因組中最為保守的部分編碼而來，不同基因型的ＨＣＶ其核心抗原保持不變。有研究表明，患者外周血中ＨＣＶ核心抗原與ＨＣＶ ＲＮＡ水平具有良好的相關性，ＨＣＶ核心抗原陽性者，表明有ＨＣＶ ＲＮＡ感染［１］。ＨＣＶ抗體為感染ＨＣＶ后的患者外周血中產生的與病毒抗原相對應的抗體。當健康人群感染上ＨＣＶ后，在最初一段時間內，患者體內并不立即產生抗體，而是要經過一定的時期，這一時期即為ＨＣＶ感染的“窗口期”。當ＨＣＶ病毒進行大量復制，逐步產生的抗體量增加到可以檢測出時，大約要經過８２天［２］。因此在“窗口期”進行ＨＣＶ抗體檢測并不能反映ＨＣＶ感染的真實情況。對于處于ＨＣＶ感染“窗口期”的獻血員，此時進行抗ＨＣＶ檢測，結果為陰性，而使陽性血液誤定為陰性，給受血者帶來危害。

實驗結果表明，１５例ＨＣＶ核心抗原陽性血樣中，只有１１例抗ＨＣＶ陽性，而這１５例ＨＣＶ核心抗原陽性血樣經熒光定量ＰＣＲ確診，均為陽性。這說明，未檢測出抗ＨＣＶ的另４例，很有可能就是處于“窗口期”的獻血員。而通過對獻血員進行ＨＣＶ核心抗原的檢測，就能夠縮短“窗口期”的時間，盡量提前檢測出ＨＣＶ感染的情況，從而減少醫源性丙型肝炎的發生和傳播。筆者認為，在ＰＣＲ檢測難以普遍推廣的情況下，以ＨＣＶ核心抗原檢測代替ＨＣＶ抗體檢測是提高獻血員ＨＣＶ檢出率，增強臨床輸血的安全性的較為理想的方法。

參考文獻：

１．Ｎｕｂｌｉｎｇ  ＣＭ，Ｕｎｇｅｒ  Ｍ，Ｃｈｕｄｙ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ＨＣＶ  ｃｏｒｅ  ａｎｔｉｇｅｎ  ａｎｄ  ＨＣＶ  ＲＮＡ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｅａｒｌｙ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｐｈａｓｅ［Ｊ］．Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，２００２，４２（８）：１０３７～１０４５．

２． 李執如，周瓊秀．日本進行ＨＣＶ、ＨＢＶ和ＨＩＶ病毒核酸篩查的現狀［Ｊ］．國外醫學輸血及血液學分冊．２００３，２６（２）：１８３～１８５．