[摘要]  目的  探討國外丙型肝炎病毒游離核心抗原檢測試劑盒的質(zhì)量及可能的用途。方法  用該試劑對自然供血員及丙型肝炎可疑感染者血樣共9215份血清進行檢測，并對檢測數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。結(jié)果  該試劑在9215份血清中篩出兩份HCV游離核心抗原陽性血清，其中一份為抗原和抗體同時陽性血清，產(chǎn)生的抗體為核心區(qū)抗體。另外一份為單獨游離核心抗原陽性血清。臨床考核發(fā)現(xiàn)該試劑出現(xiàn)了較多的假陽性結(jié)果。結(jié)論  該檢測系統(tǒng)可用于高通量檢測；臨床考核發(fā)現(xiàn)，該試劑可能檢出了游離核心抗原單獨陽性的窗口期樣品；該試劑界值確定太低，出現(xiàn)了部分非特異結(jié)果，在這方面，該試劑還有待改進。
   
　　［關(guān)鍵詞］  肝炎病毒；試劑；臨床考核

　　Analysis of HCVcAg kit clinic trial

　　YANG Zhen，QI Zi-bai，YU Yang，et al.

　　National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biology Products，Beijing 100050，China

　　［Abstract］  Objective  To investigate the quality of one imported HCVcAg EIA kit and analyse this kit’s different uses.Methods  9215 sera were detected by HCVcAg EIA kit.The suspeuous samples were confirmed with confirmed neutralization test and RIBA，and we statistise these results in sucession.Results  This kit founded two positive HCVcAg sera.One of two sera was positive antibody to core meantime，another one was only positive HCVcAg during the preseroconversion window.Conclusion  We think this kit can efficacy detect hepatitis C core antigen during the preseroconversion window.We suggest the manufacture must establish the system of correct cutoff.

　　［Key words］  hepatitis virus;reagent;clinical test

    國家實行血源丙型肝炎病毒抗體篩查以來，臨床用血質(zhì)量得到很大提高，我單位從1995年開始對丙型肝炎病毒抗體診斷試劑進行分批檢定，經(jīng)多方面多年努力，我國使用的國內(nèi)外丙型肝炎病毒抗體診斷試劑質(zhì)量有了很大提高［1］，這進一步促進了篩查血源質(zhì)量的提高。但在理論上，丙型肝炎病毒感染的早期存在一個“窗口期”［2］，在這一階段，檢測不到丙型肝炎病毒抗體，因此在實際工作中，可能存在極少數(shù)漏檢的問題。近期，美國研制出丙型肝炎病毒游離核心抗原檢測試劑盒，本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)法原理（ELISA）檢測人血清或血漿樣品中丙型肝炎病毒游離核心特異性抗原，對丙型肝炎進行早期診斷，以減少“窗口期”漏檢。我們對該試劑進行了臨床考核，并對檢測結(jié)果進行初步分析。

　　1  材料與方法

　　1.1  試劑 

　　強生傲拓公司生產(chǎn)的丙肝病毒（HCV）游離核心抗原診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）［antibody to hepatitis C core antigen murine monoclonal ELISA test system ORTHO antibody to HCV core antigen ELISA test system］（批號：AGK124；效期：2004年2月）。強生傲拓公司生產(chǎn)的丙肝病毒（HCV）總抗原診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）（Ortho Trak-CTMAssa，批號：AGK124；效期：2005年2月）。強生傲拓臨床診斷公司生產(chǎn)的丙肝病毒（HCV）抗原中和確證診斷試劑盒（批號：EXE205；效期：2003年10月）。CHIRON公司生產(chǎn)的HCV抗體確證試劑RIBA3.0 CHIRON RIBA HCV3.0SIA HEPATITIS C VIRUS ENCODED ANTIGEN（Recombinant c33c and NS5 antigens;Synthetic 5-1-1，c100 and c22 peptides）（批號：AE2029；效期：2003年11月）。強生傲拓公司生產(chǎn)的丙肝病毒（HCV）抗體診斷試劑盒（批號：EXE343；效期：2004年5月）。ProclexTMHIV-1 and HCV Discriminatory Probe Reagents。

　　1.2  樣品
 
　　6190份樣品來自北京某血站、766份來自四川成都某血站、1693份來自廣東深圳某血站獻血員、566份來自河北廊坊等地區(qū)的HCV感染或可疑感染的獻血員，每份樣品分管保存于-70 ℃。

　　1.3  儀器 

　　酶標(biāo)儀，Ortho HCV Antigen Evaluation系統(tǒng)。

　　1.4  操作 

　　所有檢測嚴格按使用說明書操作。初篩檢測分為兩部分，可疑感染者血樣由我室進行單孔檢測初篩，初篩游離核心抗原陽性血清進行復(fù)檢和中和確證。獻血員血清由北京、深圳、成都地區(qū)相關(guān)血站進行單孔檢測初篩，初篩游離核心抗原陽性血清進行復(fù)檢和中和確證。所有初篩游離核心抗原陽性血清由我室進行雙孔復(fù)檢，復(fù)檢游離核心抗原陽性血清進行三孔中和確證試驗。三孔中和確證試驗為陽性結(jié)果才判定為游離核心抗原陽性血清。同時對所有初篩游離核心抗原陽性血清利用強生傲拓臨床診斷公司生產(chǎn)的丙肝病毒（HCV）抗體診斷試劑盒進行三孔抗體檢測判斷其抗體產(chǎn)生情況，以便分析這些血清是否為窗口期樣品。利用抗體確證試劑RIBA3.0對確證抗原陽性血清和部分復(fù)篩抗原陽性血清進行RIBA檢測，結(jié)合抗體診斷試劑盒檢測結(jié)果，判定抗體陽性血清產(chǎn)生的是什么區(qū)域抗體。

　　1.5  結(jié)果判定 

　　所有抗原判斷結(jié)果由Ortho-Clinical Diagnostics HCV Antigen Evaluation系統(tǒng)軟件完成。當(dāng)待測樣品信號/臨界閾值（S/CO）＜1，樣品為陰性。當(dāng)待測樣品信號/臨界閾值（S/CO）≥1，報告顯示樣品為陽性。

　　2  結(jié)果

　　2.1  各個血站考核HCVcAg試劑初篩結(jié)果 

　　見表1，在北京某血站6190份血樣中，初篩出55份陽性樣本。在深圳某血站1693份血樣中，初篩出12份陽性樣本。在成都某血站766份血樣中，初篩出6份陽性樣本。在廊坊地區(qū)566份血樣中，初篩出77份陽性樣本。隨后我們對這些樣品進行復(fù)篩和確證。表1  各個血站HCVcAg檢測試劑初篩結(jié)果 （略）

　　2.2  北京某血站HCVcAg檢測試劑復(fù)檢結(jié)果 

　　我們考核HCVcAg試劑，對北京某血站初篩出55份陽性樣本，雙孔復(fù)檢結(jié)果，見表2。根據(jù)表2計算出，對北京某血站血樣該試劑初篩陽性率為0.889%，復(fù)檢陽性率為0.081%，確證陽性率為0.016%。復(fù)檢出初篩陽性比率為9.111%，確證與初篩陽性比率為1.799%，確證與復(fù)篩陽性比率為19.750%。并對北京某血站HCVcAg初篩S/C值分布規(guī)律進行分析，見圖1和表3。分析表明，S/C值在0.35~0.70的血清分布最多。表2  北京某血站HCVcAg檢測試劑復(fù)檢結(jié)果（略）注：確證 HCV抗原結(jié)果為中和試劑確證檢測結(jié)果，HCV抗原檢測結(jié)果為ELISA檢測結(jié)果，下同表3  對北京某血站血樣HCVcAg檢測試劑初篩（略）
　　
　　2.3  深圳某血站復(fù)檢結(jié)果 

　　我們考核HCVcAg試劑，對深圳某血站初篩出12份陽性樣本，雙孔復(fù)檢結(jié)果，見表4。可以看出，對深圳某血站血樣該試劑初篩陽性率為0.709%，復(fù)檢陽性率為0.118%，確證陽性數(shù)為0。復(fù)檢與初篩陽性比率為16.640%。對深圳某血站HCVcAg檢測S/C值分布規(guī)律進行分析，見圖2和表5。它的分布規(guī)律與北京差異無顯著性（P＞0.05）。表4  深圳某血站HCVcAg復(fù)檢結(jié)果（略）表5  對深圳某血站血樣HCVcAg檢測試劑初篩（略）

　　2.4  成都某血站復(fù)檢結(jié)果 

　　我們考核HCVcAg試劑，對成都某血站初篩出6份陽性樣本雙孔復(fù)檢結(jié)果，見表6。可以看出，對成都某血站血樣試劑初篩陽性率為0.780%，復(fù)檢陽性數(shù)為0，確證陽性數(shù)為0。對成都某血站HCVcAg檢測S/C值分布規(guī)律進行分析，見圖3和表7。它的分布規(guī)律與北京差異無顯著性（P＞0.05）。表6  成都某血站HCVcAg復(fù)檢結(jié)果（略）表7  對成都某血站血樣HCVcAg檢測試劑初篩S/C值分布表（略）

　　2.5  廊坊地區(qū)樣品復(fù)檢結(jié)果 

　　我們考核HCVcAg試劑，對廊坊地區(qū)初篩出6份陽性樣本雙孔復(fù)檢結(jié)果，見表8。可以看出，對廊坊地區(qū)血樣該試劑初篩陽性率為13.600%，復(fù)檢陽性率為5.830%，確證陽性率為0.177%。復(fù)檢與初篩陽性比率為3.036%，確證與初篩陽性比率為1.301%，確證與復(fù)篩陽性比率為3.036%。對廊坊地區(qū)HCVcAg檢測S/C值分布規(guī)律進行分析，見圖4和表9。它的分布規(guī)律與其他血站差異有顯著性（P＜0.01）。表8  廊坊地區(qū)樣品HCVcAg復(fù)檢結(jié)果（略）表9  對河北廊坊血樣HCVcAg檢測試劑初篩（略）

　　2.6  對確證抗原陽性血清和部分復(fù)篩抗原陽性血清進行RIBA檢測  結(jié)果見圖5。RIBA抗體確證試劑的判定方法是IgGcontro Ⅰ和IgGcontro Ⅱ均顯色，實驗成立。抗體產(chǎn)生條帶的判定依次為NS4、NS3、Core和NS5。若兩條抗體條帶顯色，判為抗體陽性血清，若一條抗體條帶顯色，判為疑似抗體陽性血清，若所有抗體條帶不顯色，判為抗體陰性血清。結(jié)合強生傲拓的丙肝病毒抗體診斷試劑盒三孔抗體檢測結(jié)果，17號樣品是CORE區(qū)抗體陽性血清。而16號為游離核心抗原單獨陽性樣品。

　　3  討論

    本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)法原理（ELISA）檢測人血清或血漿樣品中丙型肝炎病毒核心特異性抗原［3］，該試劑方法簡單，易于操作，該檢測系統(tǒng)可同時處理大量樣品，可用于高通量檢測。確證的兩份抗原陽性血清和部分復(fù)篩抗原陽性血清進行RIBA檢測結(jié)果顯示，有一份抗原和抗體同時陽性的血清，產(chǎn)生的抗體是核心區(qū)抗體，這與相關(guān)的研究一致［4］。與國外的臨床考核研究相比，均檢出了單獨游離核心抗原陽性血清［5］。根據(jù)四家血站復(fù)檢與初篩陽性比率、確證與初篩陽性比率，確證與復(fù)篩陽性比率比較發(fā)現(xiàn)。該試劑出現(xiàn)了較多的非特異性反應(yīng)，我們認為可能與該試劑閾值確定太低有關(guān)，已建議其改進。根據(jù)廊坊地區(qū)樣品復(fù)檢與初篩陽性比率、確證與初篩陽性比率、確證與復(fù)篩陽性比率與其他血站相關(guān)比值比較發(fā)現(xiàn)，其非特異性反應(yīng)更高，這可能與廊坊地區(qū)血樣比較陳舊有關(guān)。對各個血站HCVcAg初篩S/C值分布規(guī)律進行分析，我們發(fā)現(xiàn)，廊坊地區(qū)樣品與北京、成都、深圳相關(guān)血站S/C值分布規(guī)律存在顯著差異（P＜0.01），廊坊地區(qū)血樣中，部分為HCV抗體陽性血清，而HCV抗體陽性血清對游離核心抗原檢測是否有影響，這有待進一步的研究。

［參考文獻］

　　1  楊振，祁自柏，張庶民，等.國產(chǎn)丙型肝炎病毒NS3抗原的質(zhì)量檢定.中華實驗和臨床病毒學(xué)雜志，1998，12（3）：253-257.

　　2  Legrer TJ，Riggert J，Simson G，et al.Testing of individual blood donations for HCV RNA reduces the residual risk of Transfusion-transmitted HCV infection.transfusion，2000，40：192-197.

　　3  Courouce AM，Le Marrec N，Bouchardeau F，et al.Efficacy of hepatitis C core antigen detection during the preseroconversion window.Tranfusion，2000，40：1198-1202.

　　4  Lee SR，Peterson J，Niven P，et al.Efficacy of an HCV core antigen ELISA for the identification of “window phase”blood donations.Vox Sang，2001，80（1）：19-23.

　　5  Syria Laperche，Nadine Le Marrec，Nicole Simon，et al.A new HCV core antigen assay based on disassociation of immune complexes：an alternative to molecular biology in the diagnosis of early HCV infection.Transfusion，2003，43：958-962.

　　作者單位： 100050 北京，中國藥品生物制品檢定所